Methoden & Technologien

droplet digital PCR Analysis
ddPCR

Die digitale PCR (ddPCR) ist eine wegweisende Methode in der genetischen Diagnostik, die die exakte Quantifizierung von DNA und RNA ermöglicht. Diese innovative Technik zeichnet sich durch ihre außerordentliche Präzision und Empfindlichkeit aus, indem sie DNA- oder RNA-Moleküle vor der Amplifikation in zahlreiche Einzelreaktionskammern verteilt, mit dem Ziel, gezielt nur ein einziges Zielmolekül pro Reaktionskammer zu erhalten. Im Anschluss erfolgt eine Endpunkt-PCR, bei der fluoreszenzmarkierte Sonden verwendet werden. Das resultierende Fluoreszenzsignal ermöglicht eine äußerst genaue Quantifizierung.

Die ddPCR ist von herausragender Bedeutung in der genetischen Diagnostik, da sie genetische Veränderungen auf molekularer Ebene nachweisen kann, was für die Identifizierung diagnostisch relevanter Veränderungen und die Entwicklung personalisierter medizinischer Ansätze entscheidend ist. Sie basiert auf der Aufteilung von DNA- oder RNA-Proben in tausende Einzelreaktionskammern, in denen die Amplifikation stattfindet. Dieser Ansatz ermöglicht eine absolute Quantifizierung, da jedes Reaktionskompartment unabhängig gemessen wird, und die Anzahl der positiven Reaktionen direkt mit der ursprünglichen Molekülmenge in der Probe korreliert.

 Anwendungen der ddPCR:

-In der Krebsforschung ermöglicht sie die Detektion seltener Varianten, Fusionen und Veränderungen in Tumorgeweben, was für die Frühdiagnose und personalisierte Therapieansätze entscheidend ist.

– In der Krebsforschung ermöglicht sie die Detektion seltener Varianten, Fusionen und Veränderungen in Tumorgeweben, was für die Frühdiagnose und personalisierte Therapieansätze entscheidend ist.

– Bei Infektionskrankheiten wird sie zur quantitativen Bestimmung der Viruslast im Blut eingesetzt und zur Überwachung der Therapieeffizienz.

– In der Genetik und Vererbung ermöglicht sie den Nachweis und die Quantifizierung spezifischer genetischer Varianten in DNA-Proben.

Die ddPCR bietet erhebliche Vorteile, darunter präzise quantitative Ergebnisse, hohe Empfindlichkeit zur Detektion seltener Varianten und minimale Beeinflussung durch PCR-Inhibitoren oder Hintergrund-DNA. Mögliche Herausforderungen oder Einschränkungen könnten in den Bereichen Kosten und Durchsatz auftreten, da ddPCR im Vergleich zur herkömmlichen PCR aufwendiger sein kann und spezielle Geräte sowie Fachkenntnisse erfordert. Dennoch überwiegen die Vorteile der ddPCR und ihr Potenzial für die Entwicklung maßgeschneiderter medizinischer Ansätze in der genetischen Diagnostik.